根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/20 21:16:57
![根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.](/uploads/image/z/1037363-59-3.jpg?t=%E6%A0%B9%E7%98%A4%E5%86%9C%E6%9D%86%E8%8F%8C%E6%84%9F%E5%8F%97%E6%80%81%E5%88%B6%E4%BD%9C%E6%97%B6%E6%B1%A1%E6%9F%93%E6%98%AF%E6%80%8E%E4%B9%88%E5%9B%9E%E4%BA%8B%3F%E8%BD%AC%E5%8C%96%E8%B4%A8%E7%B2%92%E8%BF%9B%E5%8E%BB%E5%90%8E%2C%E9%95%BF%E5%87%BA%E5%90%8E%E6%98%AF%E7%99%BD%E8%89%B2%E4%B8%8D%E9%80%8F%E6%98%8E%E7%9A%84%E8%8F%8C%E8%90%BD%2C%E9%83%BD%E4%B8%8D%E5%83%8F%E6%98%AF%E5%86%9C%E6%9D%86%E8%8F%8C.)
根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.
根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.
根瘤农杆菌感受态制作时污染是怎么回事?转化质粒进去后,长出后是白色不透明的菌落,都不像是农杆菌.
你直接拿没有切的质粒去转化涂板 看有没有长 如果长了就是连接的问题 如果没长就是感受态的问题
你直接拿没有切的质粒去转化涂板 看有没有长 如果长了就是连接的问题 如果没长就是感受态的问题
这不是很正常么 长的菌太多了才不正常吧 做个菌P看看呗 然后再测序
以前做过农杆菌转化,氯化钙法是可行的。万一转不进去 改用电转化吧。效率高很多的。
你确定转化过程和感受态没问题吗?有没有做过平行的其他转化对照?如果别的质粒可以转进去,并且生长,则确实说明你的转化过程和感受态没问题。
如果是这种情况,那么问题有可能是在酶切后回收这一步。回收后的DNA质量直接影响到之后的T4连接酶作用和细菌转化。包括酶切回收buffer没有洗脱干净,或者留有酒精(对连接酶来说是比较致命的一点),或者最后的溶解buffer的酸碱值有问题,都会影响到细菌接受...
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你确定转化过程和感受态没问题吗?有没有做过平行的其他转化对照?如果别的质粒可以转进去,并且生长,则确实说明你的转化过程和感受态没问题。
如果是这种情况,那么问题有可能是在酶切后回收这一步。回收后的DNA质量直接影响到之后的T4连接酶作用和细菌转化。包括酶切回收buffer没有洗脱干净,或者留有酒精(对连接酶来说是比较致命的一点),或者最后的溶解buffer的酸碱值有问题,都会影响到细菌接受质粒的。建议你重新换一个酶切回收试剂盒。并且每一步都做好平行对照。查找出问题所在。
百替生物专业提供克隆构建服务。有需要也可以寻求公司的帮助。
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问题描述不清。“同时做对照:质粒酶切回收的产物电转”?也就是说拿线性的质粒去电转做对照?
如果是这样,你不如用感受态细胞直接做阴性对照,再用原质粒转化做阳性对照,这样更好分析结果。多克隆位点是很小一段,你认为切成2段,但实际可能只切了一刀甚至一刀都没切完
你还是把过程描述清楚些先...
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问题描述不清。“同时做对照:质粒酶切回收的产物电转”?也就是说拿线性的质粒去电转做对照?
如果是这样,你不如用感受态细胞直接做阴性对照,再用原质粒转化做阳性对照,这样更好分析结果。多克隆位点是很小一段,你认为切成2段,但实际可能只切了一刀甚至一刀都没切完
你还是把过程描述清楚些先
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