帮我设计个实验,ELISA的..实验内容是测鸡血液中IgG的含量,现有药品有分次提取的待测鸡血;鸡IgG;兔抗鸡IgG.....
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/20 06:27:08
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帮我设计个实验,ELISA的..实验内容是测鸡血液中IgG的含量,现有药品有分次提取的待测鸡血;鸡IgG;兔抗鸡IgG.....
帮我设计个实验,ELISA的..
实验内容是测鸡血液中IgG的含量,现有药品有分次提取的待测鸡血;鸡IgG;兔抗鸡IgG...
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帮我设计个实验,ELISA的..实验内容是测鸡血液中IgG的含量,现有药品有分次提取的待测鸡血;鸡IgG;兔抗鸡IgG.....
步骤:
1包被:用包被缓冲液稀释待测鸡血(可以稀释成不同的浓度,如1:100,1:1000,1:10000),包被液稀释鸡IgG(要做背比稀释),100ul/孔,4度过液.
2封闭:3%BSA的PBST,100ul/孔,4度过夜或37度1h.
3一抗:用含1%BSA的PBST稀释兔抗IgG(比例按照抗体的说明书)100ul/孔,37度1h
如果这个抗体应该是HRP标记的.可以直接加底物反应,如果不是还需要再加一步孵育HRP标记的抗兔抗体.
4底物显色:加TMB显色液(这个公司都有卖的)100ul/孔.避光10-15分钟.
5终止:2M硫酸终止.
6酶标仪检测.
最后根据标准品作标准曲线,样品的OD带入标准曲线计算浓度.
这个很复杂哎...因为鸡血里面蛋白也是很多的,不知道会不会有cross banding,所以事先还得纯化鸡血得到IgG...如果不考虑这个那就是用标准的鸡IgG,配成已知浓度的,固化,一抗,二抗嘛的,做elisa,做出不同浓度的吸光度,然后得到吸光度和浓度关系的标准曲线。接下来把样品也做了,测吸光度,和标准曲线的比较,得出浓度。至于elisa的具体操作你还是自己看实验指导吧......
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这个很复杂哎...因为鸡血里面蛋白也是很多的,不知道会不会有cross banding,所以事先还得纯化鸡血得到IgG...如果不考虑这个那就是用标准的鸡IgG,配成已知浓度的,固化,一抗,二抗嘛的,做elisa,做出不同浓度的吸光度,然后得到吸光度和浓度关系的标准曲线。接下来把样品也做了,测吸光度,和标准曲线的比较,得出浓度。至于elisa的具体操作你还是自己看实验指导吧...
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Elisa的实验很常用,先准备标本,再用试剂盒测试。这试剂盒很好买,你可找runwelltac的公司,我就是从他们那买的。他会提供说明步骤