【求助】有关细胞划痕法操作中不明白的我做的是大鼠血管平滑肌细胞的迁移能力测定给予不同浓度高糖刺激,并给予不同浓度药物干预后观察这是网上搜到的流程:先用marker笔在6孔板背后
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/20 11:14:52
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【求助】有关细胞划痕法操作中不明白的
我做的是大鼠血管平滑肌细胞的迁移能力测定
给予不同浓度高糖刺激,并给予不同浓度药物干预后观察
这是网上搜到的流程:
先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。
第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。
用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
放入37度5%co2培养箱,培养。按0,12,24小时取样,拍照。
我的问题是:
司徒镇强的细胞培养书中细胞划痕的具体操作是:包被基底膜-水化基底膜-制备单层细胞-人工划痕-测量迁移率,但是我看到的网上的资料同上,没有制备基底膜这步,所以,是不是不用制备基底膜?
2.上面第4步中PBS清洗后是不是可以直接加条件培养基?
3结果能不能数4个不同象限迁移的细胞数来判断迁移能力?
希望做过这个实验的朋友帮忙解答下,
还有就是到了第三步,用枪头划之前需要把培养液倒掉吗?还是划完后再倒掉旧的培养液换成条件培养基?
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1、不需要制备基底膜了.
2、最好用无血清培养基洗涤细胞
3、可以用迁移的细胞数来说明细胞迁移能力
4、划痕以后需要洗涤细胞,然后加入条件培养基.