怎么确保RNA中的DNA被去掉?操作上怎么简单快速?使用 去DNA试剂盒 怎么样?还是用DNA酶?DNA酶有单卖的么?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/24 16:31:03
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怎么确保RNA中的DNA被去掉?操作上怎么简单快速?使用 去DNA试剂盒 怎么样?还是用DNA酶?DNA酶有单卖的么?
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怎么确保RNA中的DNA被去掉?操作上怎么简单快速?使用 去DNA试剂盒 怎么样?还是用DNA酶?DNA酶有单卖的么?
如果你是新手,建议你操作严格一些,最好能养成严谨的实验习惯吧.
总RNA提取出来,变性胶电泳;
去除总RNA中残留的DNA,变性胶电泳检测是否有降解,及降解的程度,(如果你是要做PCR,尤其是qPCR,而且你的引物不是跨内含子的或者编码序列中没有内含子的,这一步是必需的)
再进行后续的实验.
总RNA去DNA,有试剂盒,也有单卖得,具体的操作根据你买来的试剂的说明书来,记得防止RNA酶的降解,需要用DEPC处理过的水.和你提取总RNA的时候一样小心对待.
基本的反应体系如下:
总RNA
DNase 缓冲液
DNase
补DEPC处理过的水 到 一定的体系,
现在qPCR反应试剂盒里一般都有DNase的,按照说明书来进行操作
DNA酶有单卖的。
我用life technologies的DNAse I 还不错啊。他们既卖单品也卖试剂盒,可以根据你的需要咨询。但是酶消化完以后的失活或再提纯步骤很重要,不然可能影响下游的PCR反应。
操作上?我从来没去过,都是用内含子引物PCR十几圈,看条带,(越亮DNA越多)
看着差不多就可以了,如果DNA过多是操作过失,技术问题。
DNA酶大多RNA试剂盒都赠一管,DNA酶本身也不便宜,可以单卖。
质量好的推荐invitrogen的,就是有点贵,全式金的也可以啊。
话说回来,不用盒子也毫无压力啊
欢迎追问,求采纳加DNA酶处理的话,在哪个步骤加酶呢?...
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操作上?我从来没去过,都是用内含子引物PCR十几圈,看条带,(越亮DNA越多)
看着差不多就可以了,如果DNA过多是操作过失,技术问题。
DNA酶大多RNA试剂盒都赠一管,DNA酶本身也不便宜,可以单卖。
质量好的推荐invitrogen的,就是有点贵,全式金的也可以啊。
话说回来,不用盒子也毫无压力啊
欢迎追问,求采纳
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