各位看看我的引物酶切位点和保护碱基有什么问题吗5’-CCTGAATTCATGGCTAGCCTTCTCA-3’5’-CCGCTCGAGTATTTA ATTGAATAGTT-3’
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/21 10:13:48
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各位看看我的引物酶切位点和保护碱基有什么问题吗
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你加的是EcoRI和XhoI位点把?酶切位点和保护碱基都没问题,不过要指出一点,避免3'端出现A或T,最好是C或G,是A或T的话扩增效率比较低.
酶切位点不会有问题啊 如果是构建重组质粒,就要避免目的片段中相应的酶切位点;保护碱基的种类取决于引物的GC含量,这个影响的是退火温度;保护碱基的数量和限制酶的种类有关,不同的限制酶添加的保护碱基的数量有所差异,一般来说,保护碱基添加数量为3,具体参见http://wenku.baidu.com/view/1db7d518a76e58fafab00350.html...
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酶切位点不会有问题啊 如果是构建重组质粒,就要避免目的片段中相应的酶切位点;保护碱基的种类取决于引物的GC含量,这个影响的是退火温度;保护碱基的数量和限制酶的种类有关,不同的限制酶添加的保护碱基的数量有所差异,一般来说,保护碱基添加数量为3,具体参见http://wenku.baidu.com/view/1db7d518a76e58fafab00350.html
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还可以,但是要注意退火温度,还有3‘端尽量避免a t