SDS PAGE电泳 跑完电泳后,先用20%乙醇固色15分钟左右后,用去离子水清洗胶体,加入染色G250,底部条带,瞬间从蓝色变成黄色,(貌似实验已经失败,不清楚原因)变色后,想最后博一下,继续染色一夜,
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/21 16:45:54
![SDS PAGE电泳 跑完电泳后,先用20%乙醇固色15分钟左右后,用去离子水清洗胶体,加入染色G250,底部条带,瞬间从蓝色变成黄色,(貌似实验已经失败,不清楚原因)变色后,想最后博一下,继续染色一夜,](/uploads/image/z/7003672-16-2.jpg?t=SDS+PAGE%E7%94%B5%E6%B3%B3+%E8%B7%91%E5%AE%8C%E7%94%B5%E6%B3%B3%E5%90%8E%2C%E5%85%88%E7%94%A820%25%E4%B9%99%E9%86%87%E5%9B%BA%E8%89%B215%E5%88%86%E9%92%9F%E5%B7%A6%E5%8F%B3%E5%90%8E%2C%E7%94%A8%E5%8E%BB%E7%A6%BB%E5%AD%90%E6%B0%B4%E6%B8%85%E6%B4%97%E8%83%B6%E4%BD%93%2C%E5%8A%A0%E5%85%A5%E6%9F%93%E8%89%B2G250%2C%E5%BA%95%E9%83%A8%E6%9D%A1%E5%B8%A6%2C%E7%9E%AC%E9%97%B4%E4%BB%8E%E8%93%9D%E8%89%B2%E5%8F%98%E6%88%90%E9%BB%84%E8%89%B2%2C%EF%BC%88%E8%B2%8C%E4%BC%BC%E5%AE%9E%E9%AA%8C%E5%B7%B2%E7%BB%8F%E5%A4%B1%E8%B4%A5%2C%E4%B8%8D%E6%B8%85%E6%A5%9A%E5%8E%9F%E5%9B%A0%EF%BC%89%E5%8F%98%E8%89%B2%E5%90%8E%2C%E6%83%B3%E6%9C%80%E5%90%8E%E5%8D%9A%E4%B8%80%E4%B8%8B%2C%E7%BB%A7%E7%BB%AD%E6%9F%93%E8%89%B2%E4%B8%80%E5%A4%9C%2C)
SDS PAGE电泳 跑完电泳后,先用20%乙醇固色15分钟左右后,用去离子水清洗胶体,加入染色G250,底部条带,瞬间从蓝色变成黄色,(貌似实验已经失败,不清楚原因)变色后,想最后博一下,继续染色一夜,
SDS PAGE电泳
跑完电泳后,先用20%乙醇固色15分钟左右后,用去离子水清洗胶体,加入染色G250,底部条带,瞬间从蓝色变成黄色,(貌似实验已经失败,不清楚原因)变色后,想最后博一下,继续染色一夜,后用5%乙酸脱色一天一夜,但颜色完全未脱去,请问是什么原因?染液配制还是前面操作有问题?
本人是职场新人,第一次做这个实验,现在很纠结.
我刚刚发现,实习生在配浓缩胶的时候 没有用1.0M的Tris缓冲液 而错误的使用了1.5M的 是不是因为这个原因的,因为这样两种胶就没有PH的梯度差了
我重复了一遍实验,又查了一些资料,条带变黄是因为缓冲环境偏酸,染色未脱及没色带,是因为染液配制问题。
染色一个晚上是没有影响的,只要脱色时间长一点就可以了
SDS PAGE电泳 跑完电泳后,先用20%乙醇固色15分钟左右后,用去离子水清洗胶体,加入染色G250,底部条带,瞬间从蓝色变成黄色,(貌似实验已经失败,不清楚原因)变色后,想最后博一下,继续染色一夜,
条带变黄这个现象没有碰到过,什么叫底部条带变成黄色,其它条带呢?有正常的么?染色分快染和慢染,快染做法是先用染色液进行染色1h左右,如果嫌麻烦就在微波炉里加热30s,再染30分钟左右的样子就可以了,然后进行脱色,1小时内更换三次脱色液,基本就可以清楚的看到条带了.慢染是先用脱色液进行15脱色,再在脱色液中加入少量染色液,可以染色过液,这样做的好处是非常省脱色液.之前什么固色这些过程我没采用过,所以没有进行过对比.不过一般染色应该用R250,G250一般用做蛋白质的定量分析.http://liufengsong.blog.163.com/blog/static/3153036520098185460881/这里介绍了G250和R250的区别.试剂和染料时间久一点没什么关系,缓冲液1-2星期重新配制一次,否则tris缓冲液PH值容易变化,会对跑胶结果有影响,具体还有什么问题可以再讨论,因为你给的信息比较少不好做分析.
貌似固定液时间太短了,一般2h以上
变黄的话可能是蛋白自身有一定的问题,也有可能是配胶时有误(但概率不大)
脱色时1天要换脱色液2-3次的
缓冲液之类的最好还是现配现用,而且试剂要冷藏。染料应该没多大关系的。
怎么可能染一夜色,时间太长了。你上网再查查染色的时间吧。
变黄不知为什么,没遇到过,但既然底部有条带,胶体和跑带应该没问题吧